25-羥基維生素D檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2020年第80號）
本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對25-羥基維生素D檢測試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。
本指導(dǎo)原則是對25-羥基維生素D檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。
本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊審批等行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。
一、適用范圍
25-羥基維生素D檢測試劑用于體外定量測定人血清或血漿樣本中25-羥基維生素D（25-hydroxyvitamin D，25-OH-VD）的濃度。
本指導(dǎo)原則適用于以酶標(biāo)記、（電）化學(xué)發(fā)光標(biāo)記等標(biāo)記方法標(biāo)記捕獲抗體，以微孔板、管、磁顆粒、微珠和塑料珠等載體包被抗體，用于體外定量檢測人血清或血漿中25-羥基維生素D含量的免疫分析試劑盒。
本指導(dǎo)原則不適用于：
1.用膠體金或其他方法標(biāo)記的定性或半定量測定人25-羥基維生素D的試劑（如試紙條、生物芯片等）；
2.擬用于單獨(dú)銷售的25-羥基維生素D校準(zhǔn)品和25-羥基維生素D質(zhì)控品；
3.色譜法原理的25-羥基維生素D檢測試劑。
根據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）和《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號），25-羥基維生素D測定試劑管理類別為Ⅱ類，分類編碼為6840。本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊申報和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。
二、注冊申報資料要求
（一）綜述資料
維生素D是一種脂溶性類固醇衍生物，是人體必需的脂溶性維生素，經(jīng)紫外線照射后可轉(zhuǎn)化為維生素D2。人體從食物攝入或在體內(nèi)合成的膽固醇經(jīng)轉(zhuǎn)變?yōu)?-脫氫膽固醇并貯存于皮下，經(jīng)紫外線照射后可轉(zhuǎn)化為維生素D3。維生素D主要有維生素D3（膽鈣化甾醇）和維生素D2（麥角鈣化甾醇）兩種形式。其水平受很多因素的影響，主要包括紫外線輻射、膳食補(bǔ)充、年齡和肥胖、種族和民族因素等。維生素D本身不具有生物活性，需要發(fā)生2次羥基化轉(zhuǎn)化為生物活性形式。第1次羥基化發(fā)生在肝臟，產(chǎn)生25-羥基維生素D，第2次羥基化主要發(fā)生在腎臟，產(chǎn)生具有生物活性代謝物1,25－二羥維生素D。當(dāng)1,25-（OH）2D足量時，它可進(jìn)一步在腎臟轉(zhuǎn)化為24,25-（OH）2D，最后發(fā)生分解代謝。循環(huán)中的25-羥基維生素D的半衰期為2-3周。
因此，在醫(yī)學(xué)上，對血液中25-羥基維生素D的檢測經(jīng)常被用于確定體內(nèi)維生素D的含量，血液中25-羥基維生素D的濃度被認(rèn)為是體現(xiàn)人體維生素D狀態(tài)的最佳指標(biāo)。
維生素D具有多重生物學(xué)作用。如可促進(jìn)小腸鈣吸收；促進(jìn)腎小管對鈣、磷的重吸收；調(diào)節(jié)血鈣平衡；其代謝物參與多種骨代謝途徑等等。維生素D缺乏與很多疾病的發(fā)生密切相關(guān)，包括骨骼疾病、自身免疫性疾病和心血管疾病等；過量攝入則可引起維生素D過多癥和腎結(jié)石等疾病。因此及時了解人體維生素D的狀態(tài)，實(shí)現(xiàn)維生素D的個體化補(bǔ)充具有重要的意義。
綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性方面說明、產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)評價、同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、臨床應(yīng)用情況、申報注冊產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的異同方面進(jìn)行介紹，應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局局令第5號）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）相關(guān)要求。
（二）主要原材料研究資料（如需提供）
1.主要原材料的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證研究資料
檢測試劑所用抗體的制備、篩選、純化以及鑒定等詳細(xì)實(shí)驗(yàn)資料。如抗體為申請人自制，則應(yīng)詳述抗體的名稱及生物學(xué)來源，申請人對該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求（如外觀、純度、蛋白濃度、效價等），且其生產(chǎn)工藝必須相對穩(wěn)定，并對其工藝有相關(guān)的驗(yàn)證。同時確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；如為申請人外購，則應(yīng)詳述其名稱及生物學(xué)來源，供應(yīng)商名稱，提交供應(yīng)商出具的抗體性能指標(biāo)及檢驗(yàn)報告，詳述申請人對該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求以及申請人確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。供應(yīng)商應(yīng)相對固定。
其他主要原材料的選擇及驗(yàn)證資料，申請人應(yīng)詳述每一原材料技術(shù)指標(biāo)的要求以及確定該原材料作為主要原材料的依據(jù)，確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。若為外購，應(yīng)提供供應(yīng)商名稱并提交出具的檢驗(yàn)報告。
2.質(zhì)控品、校準(zhǔn)品的原料選擇、制備、定值過程及實(shí)驗(yàn)資料。
3.校準(zhǔn)品的溯源性文件，包括具體溯源鏈、實(shí)驗(yàn)方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計分析等詳細(xì)資料。申請人應(yīng)根據(jù)GB/T21415—2008/ ISO17511:2003《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》提供所用校準(zhǔn)品的來源、賦值過程和相應(yīng)指標(biāo)，以及不確定度等內(nèi)容。
（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）
1.主要生產(chǎn)工藝的介紹，可以流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定方法，如各組分制備的工藝、試劑的配方及工藝關(guān)鍵參數(shù)的確定等。企業(yè)應(yīng)采用經(jīng)過驗(yàn)證，能夠保證產(chǎn)品質(zhì)量的生產(chǎn)工藝。
2.反應(yīng)體系主要包括：樣本采集及處理、樣本要求，確定反應(yīng)校準(zhǔn)品、樣本和試劑的用量，反應(yīng)條件（緩沖體系、濃度、時間、溫度、波長等條件）的確認(rèn)資料及試驗(yàn)數(shù)據(jù)，校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法等。
3.不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別闡述。
（四）分析性能評估資料
申請人應(yīng)當(dāng)提交對申報試劑進(jìn)行性能驗(yàn)證的研究資料，對于每項(xiàng)分析性能的評價都應(yīng)包括具體的研究項(xiàng)目、試驗(yàn)設(shè)計、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法（如有）、研究結(jié)論等詳細(xì)資料。性能評估時建議將試劑和所選用的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品作為一個整體進(jìn)行評價，評估整個系統(tǒng)的性能是否符合要求。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，包括試驗(yàn)地點(diǎn)、適用儀器（名稱、型號、校準(zhǔn)有效期）、試劑材料（名稱、規(guī)格、批號、儲存溫度、有效期）及所選用的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品、臨床樣本來源等。
對于本試劑（盒），建議著重對以下分析性能進(jìn)行研究：
1.準(zhǔn)確度
對測量準(zhǔn)確度的評價依次包括：與國家標(biāo)準(zhǔn)品（和/或國際標(biāo)準(zhǔn)品）的相對偏差、回收試驗(yàn)等方法，申請人可根據(jù)實(shí)際情況選擇以下方法的一項(xiàng)或幾項(xiàng)進(jìn)行研究。優(yōu)先采用與國家（國際）標(biāo)準(zhǔn)品的比對研究。
1.1相對偏差法
如有相應(yīng)國家（國際）標(biāo)準(zhǔn)品，則使用國家（國際）標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行驗(yàn)證，重點(diǎn)觀察對相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品檢測結(jié)果的偏差情況。申報試劑實(shí)測值與相應(yīng)國家（國際）標(biāo)準(zhǔn)品的相對偏差應(yīng)不超過±15%。
采用可用于評價常規(guī)方法的參考物質(zhì)/有證參考物質(zhì)（CRM）對試劑（盒）進(jìn)行測試，重復(fù)檢測3次，取測試結(jié)果記為（Xi），按公式（1）計算相對偏差（Bi）。實(shí)測值與標(biāo)示值的相對偏差應(yīng)在±15%范圍內(nèi)，如果3次結(jié)果都符合要求，即判為合格。如果大于等于2次的結(jié)果不合格，即判為不合格。如果有1次結(jié)果不符合要求，則應(yīng)重新連續(xù)測試20次，并分別按照公式（1）計算相對偏差，如果大于等于19次測試的結(jié)果符合要求，則準(zhǔn)確度判定合格。
Xi—測試濃度；
T—標(biāo)定濃度；
Bi—相對偏差。
注：首選國家參考物質(zhì)，如無國家參考物質(zhì)可選用國際參考物質(zhì)。
1.2回收試驗(yàn)
用于評估定量檢測方法準(zhǔn)確測定待測分析物的能力，結(jié)果用回收率表示,是評估準(zhǔn)確度的方法之一。
將已知濃度的高水平待測物（A）加入到低濃度的血清（或其他體液成分）B中,所加待測物A 與血清（或其他體液成分）B之間的體積比例為不大于1∶9，各重復(fù)檢測3次，取平均值?？蓞⒖脊剑?）計算回收率，25-羥基維生素D試劑盒各樣本回收率及平均回收率應(yīng)在[85%, 115%]范圍間。
式中：
R—回收率；
C—向B液中加入A 液后的檢測濃度的平均值;
V0—B液體積；
Vs—A 液體積；
C0—B液濃度的平均值；
Cs—A 液濃度。
回收試驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1.2.1所加待測物A 與血清（或其他體液成分）B之間的體積比例應(yīng)不會產(chǎn)生基質(zhì)的變化，一般在樣本體積的10%以內(nèi)并且保證在加樣過程中的取樣準(zhǔn)確度；
1.2.2保證總濃度在方法分析測量范圍內(nèi)，盡量使加入待測物后樣本中的被測物濃度達(dá)到參考值；
1.2.3可通過稀釋標(biāo)準(zhǔn)物制備不同高濃度的待測物以得到不同濃度的回收樣本，標(biāo)準(zhǔn)物的濃度應(yīng)該足夠高；
1.2.4為減少基質(zhì)效應(yīng)，盡量采用與臨床待測樣本接近的基質(zhì)，如血清（或其他體液成分）。
1.3方法學(xué)比對
采用參考方法或國內(nèi)/國際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為比對方法，與擬申報試劑同時檢測一批臨床樣品（至少40例樣本），40例樣本為在檢測濃度范圍內(nèi)不同濃度的人源樣品，且盡可能均勻分布。
從測定結(jié)果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚（參考值處）在企業(yè)規(guī)定的允許誤差范圍內(nèi)，說明兩檢測系統(tǒng)對病人標(biāo)本測定結(jié)果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋，擬申報試劑與對比方法相比不會產(chǎn)生顯著差異結(jié)果。
在實(shí)施方法學(xué)比對前，應(yīng)分別對擬申報試劑和比對試劑進(jìn)行初步評估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進(jìn)行方法學(xué)比對。方法學(xué)比對時應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。
建議與具有相同溯源性的分析系統(tǒng)作比對,相關(guān)系數(shù)（r）及對應(yīng)斜率、相對偏差/絕對偏差應(yīng)符合申請人的內(nèi)部要求，并提供制定該要求的相關(guān)依據(jù)。
方法學(xué)比對注意事項(xiàng)：
1.3.1樣本貯存時間及條件由被測組分的穩(wěn)定性而定，盡可能避免使用貯存的樣品；
1.3.2樣品應(yīng)來自于患者，并且此患者的疾病對于被測組分的影響應(yīng)明確，盡量不使用含有干擾此方法的組分或條件的樣本；
1.3.3分析濃度盡可能在報告的濃度范圍內(nèi)均勻分布。
2.空白限、檢出限
申請人可參考國際或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件確定25-羥基維生素D試劑盒的空白限、檢出限及參考區(qū)間等相關(guān)信息。25-羥基維生素D試劑盒（標(biāo)記免疫分析法）產(chǎn)品檢出限應(yīng)不高于8.1ng/mL。
空白限：一般由多個空白樣本的檢測結(jié)果，經(jīng)計算獲得。當(dāng)前階段，企業(yè)申報的25-羥基維生素D試劑盒（標(biāo)記免疫分析法）均采用競爭法。針對競爭法原理，可使用檢測零濃度校準(zhǔn)品或樣本稀釋液的方法進(jìn)行。例如重復(fù)測定20次，根據(jù)測量結(jié)果的平均值（M）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD），計算M-2SD及其對應(yīng)的濃度值，結(jié)果應(yīng)符合規(guī)定要求。
檢出限：一般由多個低濃度（含有分析物）樣本的檢測結(jié)果，結(jié)合空白限進(jìn)行計算獲得，應(yīng)根據(jù)具體產(chǎn)品的原理、檢測結(jié)果差異和分布，選擇合適的模型和分析方法（非參數(shù)/參數(shù)數(shù)據(jù)）進(jìn)行計算。
空白限及檢出限的驗(yàn)證：對5份濃度近似檢出限的低值樣本進(jìn)行檢測，每份樣本檢測5次，對檢測結(jié)果按大小進(jìn)行排序。低于申請人所確定的空白限數(shù)值的檢測結(jié)果的數(shù)量應(yīng)小于或等于3個；且無高于申請人提供的參考區(qū)間下限的檢測結(jié)果的數(shù)值。此時，可認(rèn)為申請人提供的空白限和檢出限的設(shè)置基本合理。
檢出限注意事項(xiàng)：空白樣本應(yīng)不含被測物，但其基質(zhì)應(yīng)與待測定常規(guī)樣本相同。如空白樣本難以得到，可采用去除維生素D的5%牛血清或人血清白蛋白溶液，或根據(jù)測定項(xiàng)目選用相應(yīng)基質(zhì)的樣本，但應(yīng)注意將基質(zhì)效應(yīng)減至最小。
3.線性
建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)與臨床樣本相似，但不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質(zhì)的樣本。理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定上限的混合人血清（或其他人源樣本），且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。建立一種定量測定方法的線性范圍時，需在預(yù)期測定范圍內(nèi)選擇7～11個濃度水平（建議采用梯度稀釋）。例如，將預(yù)期測定范圍加寬至130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點(diǎn)直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，可發(fā)現(xiàn)最寬的線性范圍。
驗(yàn)證線性范圍時可選擇5～7個濃度水平。所選用的濃度水平應(yīng)可覆蓋整個預(yù)期測定范圍并包括與臨床有關(guān)的重要評價濃度，如最小測定濃度或線性范圍的最低限、不同的參考值、最大測定濃度或線性范圍的高限等。采用申報試劑對每個濃度至少重復(fù)測試3次，計算平均值，將結(jié)果平均值和稀釋比例用最小二乘法進(jìn)行線性擬合，計算線性相關(guān)系數(shù)r，線性范圍應(yīng)覆蓋[8.1, 70.0] ng/mL，在申請人宣稱的線性范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)r應(yīng)≥0.99。
4.重復(fù)性
測量重復(fù)性的評估應(yīng)至少包括2個濃度水平的樣本，兩個濃度都應(yīng)在申報試劑的測量范圍內(nèi)，建議采用人源樣本或與人源樣本基質(zhì)接近的樣本進(jìn)行試驗(yàn)。當(dāng)2個濃度的重復(fù)性有顯著差異時，建議增加為三個濃度。
采用同一批試劑盒對選擇濃度在[8, 20] ng/mL和[30, 50] ng/mL的樣本各重復(fù)測試10次，計算10次測定濃度結(jié)果的平均值M和標(biāo)準(zhǔn)差SD，根據(jù)式（3）計算變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于10%。
CV—變異系數(shù)；
SD—10次測量結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)差；
M—10次測量結(jié)果的平均值。
5.批間差
用3個批號的試劑（盒）分別測試同一濃度為[30, 50] ng/mL的樣本，各重復(fù)測定10次，計算30次測定濃度結(jié)果的平均值M和標(biāo)準(zhǔn)差SD，根據(jù)式（4）得到變異系數(shù)（CV）應(yīng)≤15%。
CV—變異系數(shù)；
SD—30次測量結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)差；
M—30次測量結(jié)果的平均值。
6.分析特異性
推薦參考《WS/T416-2013 干擾實(shí)驗(yàn)指南》或相關(guān)國際、國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進(jìn)行特異性評估。
6.1交叉反應(yīng)：易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他物質(zhì)的驗(yàn)證情況，如與其他維生素D代謝產(chǎn)物的交叉反應(yīng)情況。應(yīng)至少驗(yàn)證與1,25（OH）2D2、1,25（OH）2D3的交叉反應(yīng)情況。
6.2干擾物質(zhì)：樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，如內(nèi)源性干擾物（膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯、總蛋白等）、類風(fēng)濕因子（Rheumatoid Factor，RF）、抗核抗體（Antinuclear Antibody，ANA）、人抗鼠抗體（Human Antimouse Antibody，HAMA）等干擾因子的研究。
干擾物濃度的分布應(yīng)覆蓋人體樣本生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度。建議將研究結(jié)果在說明書中進(jìn)行說明。如無法獲得含有高濃度干擾物質(zhì)的樣本，可采用純品物質(zhì)分別添加到健康人樣本、參考區(qū)間附近樣本、中濃度值樣本中的方式進(jìn)行驗(yàn)證。方法為對模擬添加樣本分別進(jìn)行驗(yàn)證，樣本量選擇應(yīng)體現(xiàn)一定的統(tǒng)計學(xué)意義，說明樣本的制備方法及干擾試驗(yàn)的評價標(biāo)準(zhǔn)，確定可接受的干擾物質(zhì)極限濃度，結(jié)果應(yīng)量化表示，禁用輕度、嚴(yán)重的模糊表述。被測物濃度至少應(yīng)包括其參考值的濃度。
6.3藥物干擾的研究可根據(jù)需要由申請人選擇是否進(jìn)行或選擇何種藥物及其濃度進(jìn)行。
6.4抗凝劑的干擾：如果申報試劑適用樣本類型包括血漿樣本，應(yīng)采用各種適用抗凝劑抗凝的血漿樣本分別與血清樣本進(jìn)行對比試驗(yàn)研究。方法為對比線性范圍內(nèi)的同一病人的血清和血漿樣本（應(yīng)包含參考值以及低值濃度樣本的檢測），以驗(yàn)證申報試劑對于血清和血漿樣本檢測結(jié)果的一致性。樣本量選擇應(yīng)體現(xiàn)一定的統(tǒng)計學(xué)意義，說明樣本的制備方法及干擾實(shí)驗(yàn)的評價標(biāo)準(zhǔn)，確定可接受的干擾物質(zhì)極限濃度。
7.可報告范圍（如適用）
可報告范圍包括可報告低限與可報告高限。低值樣本即將待測樣本進(jìn)行稀釋，產(chǎn)生接近于方法線性范圍低限濃度水平的樣本，一般為5個濃度水平，濃度水平間隔應(yīng)小于線性范圍低限的10%，重復(fù)測定10次，選取CV值等于或小于可接受界值的最低濃度水平作為可報告范圍低限。高值樣本即選取含被測物的高值樣本進(jìn)行稀釋，使其接近于線性范圍的上1/3區(qū)域內(nèi)，并記錄稀釋倍數(shù)。至少選用三個高濃度樣本，稀釋倍數(shù)應(yīng)為方法性能標(biāo)明的最大稀釋倍數(shù)、并適當(dāng)增加或減小稀釋比例，重復(fù)測定3次，試驗(yàn)過程應(yīng)明確稀釋液類型，注意基質(zhì)效應(yīng)影響，必要時應(yīng)提供基質(zhì)效應(yīng)研究有關(guān)的資料。選取還原濃度與理論濃度的偏差（%）等于或小于方法標(biāo)示CV值時的最大稀釋倍數(shù)為方法推薦的最大稀釋倍數(shù)，方法線性范圍的上限與最大稀釋倍數(shù)的乘積為該方法可報告范圍的高限。
8.其他需注意問題
8.1 對于適用多個機(jī)型的產(chǎn)品，應(yīng)提供產(chǎn)品說明書【適用機(jī)型】項(xiàng)中所列的所有型號儀器的性能評估資料。對于某些性能，可采用主機(jī)型進(jìn)行充分的性能研究，其他機(jī)型采用驗(yàn)證的試驗(yàn)方案進(jìn)行。但對于主機(jī)型的判斷，應(yīng)有充分依據(jù)。
8.2 如有多個包裝規(guī)格，需要對不同包裝規(guī)格之間的差異進(jìn)行分析或驗(yàn)證，如不同包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個包裝規(guī)格產(chǎn)品進(jìn)行分析性能評估的資料。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，企業(yè)需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的分析，可僅選擇代表規(guī)格進(jìn)行分析性能評估。
8.3 針對技術(shù)要求中所列性能指標(biāo)，應(yīng)當(dāng)對多批（至少三批）產(chǎn)品進(jìn)行分析評估，并對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析。其他性能指標(biāo)的評估申請人可結(jié)合自身產(chǎn)品特點(diǎn)確定評估批次/數(shù)量。
8.4 校準(zhǔn)品溯源及質(zhì)控品賦值（如適用）
應(yīng)參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準(zhǔn)品及試劑盒配套校準(zhǔn)品定值及不確定度的研究資料，提供質(zhì)控品賦值及其靶值范圍確定的研究資料。
8.5校準(zhǔn)品及質(zhì)控品性能評估（如適用）
如注冊單元中包含校準(zhǔn)品或質(zhì)控品，建議應(yīng)對其性能進(jìn)行評估應(yīng)至少包含外觀、裝量、準(zhǔn)確度、均一性。
8.6生物安全性（如適用）
試劑盒如含人源性成分，至少使用經(jīng)過國家批準(zhǔn)合格的人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒、丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒、乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒、梅毒螺旋抗體診斷試劑盒，對該申報試劑盒（包括校準(zhǔn)品、質(zhì)控品）進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果應(yīng)均為陰性。
（五）參考區(qū)間確定資料
應(yīng)提交建立/驗(yàn)證參考區(qū)間所采用樣本來源、詳細(xì)的試驗(yàn)資料、統(tǒng)計方法等。明確參考人群的納入、排除標(biāo)準(zhǔn)，離群值的處理，考慮不同年齡、性別、生活習(xí)慣、地域等因素，盡可能考慮樣本來源的多樣性、代表性，樣本例數(shù)應(yīng)符合統(tǒng)計學(xué)要求。
建議申請人根據(jù)臨床實(shí)際情況，參考《WS/T 402-2012臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間的制定》或其他國際國內(nèi)權(quán)威文件來確定申報試劑的參考區(qū)間。
（六）穩(wěn)定性研究資料
穩(wěn)定性研究可參考YY/T 1579-2018《體外診斷醫(yī)療器械體外診斷試劑穩(wěn)定性評價》的相關(guān)要求進(jìn)行研究。主要涉及申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究兩部分內(nèi)容。前者主要包括實(shí)時穩(wěn)定性、開瓶（復(fù)溶）穩(wěn)定性、溶解后凍存穩(wěn)定性（若涉及）等研究，申請人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)驗(yàn)方案、過程、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實(shí)時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲存條件下保存至成品有效期后的穩(wěn)定性研究資料。如產(chǎn)品包含校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，應(yīng)提供相應(yīng)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)研究資料。
樣本穩(wěn)定性應(yīng)考慮在不同儲存條件（室溫保存、冷藏和冷凍）下對不同類型樣本進(jìn)行有效期驗(yàn)證，主要包括評價方法的確定依據(jù)、具體實(shí)驗(yàn)方法、過程和結(jié)論。建議申請人選擇合理溫度范圍/溫度點(diǎn)，每間隔一定的時間段對儲存樣本進(jìn)行穩(wěn)定性驗(yàn)證，從而確認(rèn)樣本在不同溫度下儲存的有效期。試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項(xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說明。
（七）臨床評價資料
此項(xiàng)目已經(jīng)列入《關(guān)于新修訂免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)醫(yī)療器械目錄的通告》（國家藥品監(jiān)督管理局通告2018年第94號）免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)的體外診斷試劑目錄中。根據(jù)體外診斷試劑臨床評價的相關(guān)要求，申請人可按照《免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求（試行）》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2017年第179號）要求進(jìn)行臨床評價。如免臨床試驗(yàn)的相關(guān)指導(dǎo)原則有更新，應(yīng)符合相應(yīng)的指導(dǎo)原則要求。
申請人如無法或不適于上述開展臨床評價要求的，則應(yīng)按照《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求開展臨床試驗(yàn)。
（八）產(chǎn)品風(fēng)險分析資料
申請人應(yīng)考慮產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié)，從預(yù)期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關(guān)的特征、已知及可預(yù)見的危害等方面的判定以及對患者風(fēng)險的估計進(jìn)行風(fēng)險分析，應(yīng)符合YY/T 0316—2016 《醫(yī)療器械風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求。
風(fēng)險分析資料應(yīng)包含以下內(nèi)容：
1.概述：簡要介紹風(fēng)險分析資料的編制依據(jù)、適用范圍、產(chǎn)品描述（名稱、用途、適用機(jī)型）、風(fēng)險管理計劃及實(shí)施情況等；
2.風(fēng)險管理人員及其職責(zé)分工：明確風(fēng)險管理小組成員及職責(zé)，制定風(fēng)險管理流程圖，明確風(fēng)險管理活動的評審要求等；
3.風(fēng)險來源分析：明確風(fēng)險可能的來源（如產(chǎn)品故障、使用條件或環(huán)境差異、用戶端風(fēng)險、產(chǎn)品壽命等）；
4.預(yù)期用途和安全性有關(guān)特征的判定：以YY/T 0316—2016附錄H為基礎(chǔ)，判定產(chǎn)品預(yù)期用途和與安全性有關(guān)的特性，判定已知和可預(yù)見的危害、對患者風(fēng)險的評估，并形成問題清單；
5.風(fēng)險分析、風(fēng)險控制和風(fēng)險控制措施：對每一判定為危害的不正確結(jié)果的風(fēng)險進(jìn)行分析，并制定相應(yīng)的風(fēng)險控制方案及措施；
6.綜合剩余風(fēng)險的可接受性評價：對比采取風(fēng)險控制措施前后的風(fēng)險情況，對剩余風(fēng)險的可接受性進(jìn)行評價；
7.風(fēng)險控制措施驗(yàn)證：對風(fēng)險控制措施的有效性進(jìn)行驗(yàn)證分析；
8.風(fēng)險管理評審結(jié)論：風(fēng)險管理小組下達(dá)風(fēng)險評審結(jié)論。
（九）產(chǎn)品技術(shù)要求
產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局局令第5號）和《國家食品藥品監(jiān)督管理總局關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)規(guī)定。申請人應(yīng)按照相關(guān)要求編寫產(chǎn)品技術(shù)要求，內(nèi)容主要包含產(chǎn)品性能指標(biāo)和檢驗(yàn)方法。
產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)不低于YY/T 1585—2017《總25-羥基維生素D測定試劑盒（標(biāo)記免疫分析法）》的要求。性能指標(biāo)應(yīng)至少包括外觀、溯源性、準(zhǔn)確度、檢出限、線性、重復(fù)性、批間差。
（十）產(chǎn)品檢驗(yàn)報告
根據(jù)《體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式》的要求，應(yīng)提供具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗(yàn)資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)出具的產(chǎn)品檢驗(yàn)報告和產(chǎn)品技術(shù)要求預(yù)評價意見。如有相應(yīng)的國家法規(guī)發(fā)布或更新，按其要求執(zhí)行。
（十一）產(chǎn)品說明書
說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、檢驗(yàn)原理、檢驗(yàn)方法、樣本要求、檢測結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)。因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的編寫應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求。境外試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明參考文獻(xiàn)的相關(guān)信息。
以下僅對25-羥基維生素D檢測試劑說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明，說明書其他內(nèi)容應(yīng)根據(jù)《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》要求進(jìn)行編寫。
產(chǎn)品說明書內(nèi)容原則上應(yīng)全部用中文進(jìn)行表述，如含有國際通用或行業(yè)內(nèi)普遍認(rèn)可的英文縮寫，可用括號在中文后標(biāo)明，對于確實(shí)無適當(dāng)中文表述的詞語，可使用相應(yīng)英文或其縮寫。
1.【產(chǎn)品名稱】
1.1試劑名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：25-羥基維生素D測定試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法）。
注：名稱中不應(yīng)當(dāng)出現(xiàn)樣本類型、定性/定量等內(nèi)容。
1.2英文名稱（如有）應(yīng)當(dāng)正確、完整，可直譯，不宜只寫縮寫。
2.【包裝規(guī)格】
注明可測試的樣本數(shù)或裝量，如××測試/盒、××人份/盒、××mL，除國際通用計量單位外，其余內(nèi)容均應(yīng)采用中文進(jìn)行表述。應(yīng)與產(chǎn)品技術(shù)要求包裝規(guī)格一致，不得出現(xiàn)試劑盒的組成成分與包裝規(guī)格中描述不一致的情況。
3.【預(yù)期用途】
3.1第一段詳細(xì)說明試劑盒用于體外定量測定血清和/或血漿中的25-羥基維生素D的含量，適用的樣本類型應(yīng)結(jié)合實(shí)際的臨床研究情況進(jìn)行確認(rèn)。
3.2應(yīng)闡述與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥及背景情況，說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法等。
4.【檢驗(yàn)原理】
詳細(xì)說明檢驗(yàn)原理、方法，必要時可采用圖示方法描述。
5.【主要組成成分】
5.1試劑盒包含的試劑組分的名稱、數(shù)量、每個組成成分在反應(yīng)體系中的比例或濃度、其生物學(xué)來源、活性及其他特性。明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。
5.2對于非試劑組分，如實(shí)驗(yàn)用耗材（塑料滴管、封板膜、自封袋）、質(zhì)量控制證書、賦值表（靶值單）、校準(zhǔn)卡等，應(yīng)注明相關(guān)信息。
5.3對于試劑盒中不包含，但對檢驗(yàn)必需的試劑組分，應(yīng)列出此類試劑的名稱、純度，提供稀釋或混合方法及其他相關(guān)信息。
5.4試劑盒中如包含校準(zhǔn)品和/或質(zhì)控品，除明確其組成成分及生物學(xué)來源外，校準(zhǔn)品應(yīng)明確其定值及溯源性，溯源性應(yīng)寫明溯源的最高級別，包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或參考物的發(fā)布單位及編號。質(zhì)控品應(yīng)明確靶值范圍，如靶值范圍為批特異，可注明批特異，并附單獨(dú)的靶值單。
6.【儲存條件及有效期】
6.1對試劑盒的效期穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等信息做詳細(xì)介紹，包括環(huán)境溫濕度、避光條件等影響穩(wěn)定性的條件。如注冊單元含校準(zhǔn)品或質(zhì)控品且其形態(tài)為干粉（包含試劑為凍干粉狀態(tài)），則應(yīng)對復(fù)溶后的儲存條件、穩(wěn)定性做詳細(xì)介紹。如試劑需要配制，則應(yīng)對配制后的試劑的儲存條件、穩(wěn)定性做詳細(xì)介紹。
6.2保存溫度不應(yīng)有模糊表述，如“常溫”“室溫”，應(yīng)直接以℃為單位。小于3個月的穩(wěn)定期建議應(yīng)以日為單位，大于或等于3個月的穩(wěn)定期限建議以月為單位。
6.3如試劑盒各組分的穩(wěn)定性不一致，則應(yīng)對各組分的儲存條件和有效期分別進(jìn)行描述。
6.4對于可以冷凍的試劑應(yīng)注明凍融次數(shù)限制。
6.5注明生產(chǎn)日期、使用期限或失效日期（可見標(biāo)簽）。
7.【適用儀器】
說明可適用的儀器及型號，不能泛指某一系列儀器，并提供與儀器有關(guān)的信息以便用戶能夠正確選擇使用；若不同規(guī)格適用不同機(jī)型也應(yīng)說明，且與分析性能評估資料一致。
8.【樣本要求】
重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：
8.1適用的樣本類型，為保證樣本各組分穩(wěn)定所必需的抗凝劑或保護(hù)劑等。
8.2在樣本收集過程中的特別注意事項(xiàng)。如采集方式、采集時間點(diǎn)是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響，詳述操作過程注意事項(xiàng)，減少由于樣本采集或處理不當(dāng)對實(shí)驗(yàn)造成的影響。
8.3已知的干擾物。
8.4能夠保證樣本穩(wěn)定的儲存、處理和運(yùn)輸方法。
8.5應(yīng)與樣本穩(wěn)定性的研究一致。
9.【檢驗(yàn)方法】
為保證試劑的正確性，應(yīng)在以下幾個方面對試驗(yàn)操作的每一步驟進(jìn)行詳細(xì)說明，包括：
9.1試劑配制：詳細(xì)說明各試劑組分的稀釋、混合及其他必要的處理程序、試劑的使用方法（手工/半自動/全自動）、注意事項(xiàng)等。
9.2試驗(yàn)條件：如pH值、溫度、每一步試驗(yàn)所需的時間、測定主/副波長、試劑用量、樣本用量、測定方法、最終反應(yīng)產(chǎn)物的穩(wěn)定性等。待測樣品的預(yù)處理方法、試驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)。
9.3校準(zhǔn)程序（如需要）：校準(zhǔn)品的使用方法、步驟、注意事項(xiàng)，校準(zhǔn)有效期及需要重新校準(zhǔn)的情況。對于適用于手工/半自動儀器的試劑（盒）產(chǎn)品，應(yīng)說明校準(zhǔn)曲線的繪制方法。
9.4質(zhì)量控制程序：質(zhì)控品的使用方法、質(zhì)量控制方法，對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等。
9.5試驗(yàn)結(jié)果的計算或讀取，應(yīng)包括對每個系數(shù)及每個計算步驟的解釋，如果可能舉例說明。
10.【參考區(qū)間】
結(jié)合參考區(qū)間確定的研究資料，列出25-羥基維生素D試劑（盒）的參考區(qū)間，并簡要說明參考區(qū)間確定的方法，如樣本量、人群、年齡、統(tǒng)計方法等。建議注明以下字樣“由于維生素D其水平受諸多因素影響，建議各實(shí)驗(yàn)室建立自己的參考區(qū)間”。
11.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
應(yīng)根據(jù)其臨床意義對可能出現(xiàn)的結(jié)果進(jìn)行合理的解釋。
說明試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查等情況綜合考慮。
說明在何種情況下應(yīng)對樣本進(jìn)行重復(fù)測試，以及在重復(fù)測試時需要采取的樣本處理方式。
超出檢測范圍的樣本怎樣報告結(jié)果，如要得到準(zhǔn)確的結(jié)果需怎樣處理，如需稀釋，應(yīng)注明稀釋方法、最佳或最大稀釋比例等。
12.【檢驗(yàn)方法的局限性】
說明檢測結(jié)果僅供臨床參考，不能單獨(dú)作為確診或排除病例的依據(jù)。
說明可能對試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響的因素，明確常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，企業(yè)可根據(jù)自身情況，結(jié)合分析性能評估中的干擾試驗(yàn)進(jìn)行說明，并注明可接受的最高限值，不應(yīng)使用模糊的描述方式。不建議使用存在明顯干擾物如乳糜、黃疸等樣本。
13.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
與技術(shù)要求中主要性能指標(biāo)保持一致，應(yīng)至少包括：檢出限、準(zhǔn)確度、線性、重復(fù)性、批間差等。
14.【注意事項(xiàng)】
14.1必要內(nèi)容，如：“本試劑盒僅用于體外診斷”。
14.2說明檢測過程中應(yīng)嚴(yán)格按照說明書提供的操作步驟及相關(guān)實(shí)驗(yàn)室規(guī)范要求進(jìn)行操作，否則可能對結(jié)果造成的影響。
14.3如該產(chǎn)品含有人源或動物源性物質(zhì)，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。如：試劑盒內(nèi)的質(zhì)控品、校準(zhǔn)品或其他人源組分，雖已經(jīng)通過了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab和Anti-TP等項(xiàng)目的檢測，但截至目前，沒有任何一項(xiàng)檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。
14.4說明對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對待，廢棄物應(yīng)當(dāng)按當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)處置等。
14.5說明不同分析系統(tǒng)間的檢測結(jié)果可能存在的差異。
14.6其他需要說明的注意事項(xiàng)。
15.【標(biāo)識的解釋】
如有圖形或符號，請解釋其代表的意義。可參考相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)：YY/T 0466.1-2016。
16.【參考文獻(xiàn)】
注明引用參考文獻(xiàn)，其書寫應(yīng)清楚、易查詢且格式規(guī)范統(tǒng)一，符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求。
17.【基本信息】
應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》對基本信息的要求。
18.【醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號】
注明該產(chǎn)品的醫(yī)療器械注冊證編號。
19.【說明書核準(zhǔn)日期及修改日期】
應(yīng)注明該產(chǎn)品說明書的核準(zhǔn)日期，如曾進(jìn)行過說明書的變更申請，還應(yīng)該同時注明說明書的修改日期。
三、審查關(guān)注點(diǎn)
1.技術(shù)要求中性能指標(biāo)的設(shè)定及檢驗(yàn)方法是否符合相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求，技術(shù)要求的格式是否符合《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)規(guī)定。
2.產(chǎn)品說明書的編寫內(nèi)容及格式是否符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求。
3.分析性能評估指標(biāo)及結(jié)果是否滿足產(chǎn)品技術(shù)要求的規(guī)定，是否滿足本規(guī)范中各指標(biāo)驗(yàn)證的要求。
4.參考區(qū)間確定使用的方法是否合理，數(shù)據(jù)統(tǒng)計是否符合統(tǒng)計學(xué)的相關(guān)要求，結(jié)論是否和說明書聲稱一致。
5.穩(wěn)定性研究方法是否合理，穩(wěn)定性結(jié)論是否和說明書聲稱一致。
6.如采用臨床試驗(yàn)的途徑進(jìn)行臨床評價，臨床試驗(yàn)采用的樣本類型是否滿足產(chǎn)品聲稱的預(yù)期用途，樣本量及臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的選擇、對比試劑的選擇、統(tǒng)計方法及研究結(jié)果、臨床方案及報告撰寫等是否符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）對相關(guān)內(nèi)容的規(guī)定；如采用免臨床試驗(yàn)進(jìn)行同品種比對臨床評價，則審查是否符合《免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求（試行）》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2017年第179號）對相關(guān)內(nèi)容的規(guī)定。
四、編寫單位
廣東省藥品監(jiān)督管理局審評認(rèn)證中心